猪瘟病毒抗体检测试剂盒(酶联免疫法)
使用说明书
【产品名称】
通用名:猪瘟病毒抗体检测试剂盒(酶联免疫法)
英文名:Test Kit for Antibodies to Classical Swine Fever Virus (ELISA)
【包装规格】 96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒
【预期用途】 猪瘟是由猪瘟病毒(Classical Swine Fever Virus,CSFV)引起的猪的一种高度接触性、出血性和致死性传染病,其特征为高热稽留和微血管壁变性而引起的广泛出血、坏死、梗塞等,慢性以纤维素坏死性肠炎为特征。
本试剂用于检测猪血清中猪瘟病毒抗体,可用于猪瘟病毒疫苗免疫效果评价。
【原 理】
本试剂盒由预包被猪病毒重组E2蛋白的酶标板、酶标记物及其他配套试剂组成,应用酶联免疫法(ELISA)原理检测猪血清、血浆样本中猪病毒抗体。实验时在酶标板中加入对照血清和待检样本,经温育后若样品中含有猪瘟病毒抗体,则将与酶标板上抗原结合,经洗涤除去未结合的其他成分后;再加入酶标记物,与酶标板上抗原抗体复合物发生特异性结合;再经洗涤除去未结合的酶标记物,在孔中加TMB底物液,与酶标结合物反应形成蓝色产物,显色深浅与样品中的特异性抗体含量成正相关;加入终止液终止反应后,产物变为黄色;用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值,即可知样品是否含有猪病毒抗体。
【试剂盒组成】
序号 | 名称 | 规格/96T×1 | 规格/96T×2 | 规格/96T×5 |
1 | 酶标记物 | 11ml×1(红盖) | 11ml×2(红盖) | 26ml×2(红盖) |
2 | 样品稀释液 | 50ml×1(黄盖) | 50ml×1(黄盖) | 200ml×1(透明) |
3 | 20X浓缩洗涤液 | 40ml×1(白盖) | 40ml×1(白盖) | 200ml×1(透明) |
4 | 底物液A | 6ml×1(白盖) | 11ml×1(白盖) | 26ml×1(白盖) |
5 | 底物液B | 6ml×1(黑盖) | 11ml×1(棕盖) | 26ml×1(黑盖) |
6 | 终止液 | 6ml×1(黄盖) | 11ml×1(黄盖) | 26ml×1(黄盖) |
7 | 阳性对照 | 1.0 ml×1(红盖) | 1.5 ml×1(红盖) | 2.0 ml×1(红盖) |
8 | 阴性对照 | 1.0 ml×1(绿盖) | 1.5 ml×1(绿盖) | 2.0 ml×1(绿盖) |
9 | 酶标板 | 96T×1 | 96T×2 | 96T×5 |
10 | 盖板膜 | 1 | 2 | 5 |
11 | 自封袋 | 1 | 1 | 2 |
12 | 说明书 | 1 | 1 | 1 |
13 | 稀释板 | 1 | 2 | 5 |
【储存及有效期】2~8℃保存,有效期12个月。
包被板开封后请于2~8℃避光保存,避免受潮。使用期限为2个月。
【适用仪器】 含450nm、630nm波长的酶标仪,37℃恒温设备,可调微量移液器。
【样品准备】
1.取动物全血按常规方法制备血清,要求血清清亮,无溶血、无污染。样品1周内可于2~8℃保存,长期需置-20℃保存。
2.用样品稀释液将待检血清按40倍稀释(如5μl血清加入195μl样品稀释液中,混匀)。阴、阳性对照不用稀释。
3.浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解,然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释成工作洗涤液(如19份蒸馏水或去离子水+1份浓缩洗涤液)。
【检验方法】
1.使用前将试剂盒置室温30分钟,恢复至室温。
2.取所需用量酶标板条,设阴性/阳性对照各2孔,未用的板条尽快密封,2~8℃保存。
3.阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照100μl;样品孔每孔加入稀释后的样品100μl。
4.混匀,盖好盖板膜,置37℃(推荐水浴)避光反应30分钟。
5.甩去孔内液体,每孔加350μl工作洗涤液,静置30秒后弃去,重复洗涤5次,最后一次拍干。
6.每孔加酶标记物100μl,盖好盖板膜,置37℃避光反应30分钟。
7.洗涤,同步骤5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混匀,盖好盖板膜,置37℃避光反应10分钟。
9.每孔加终止液50μl,混匀,于450nm(可用630nm作参比波长)测定各孔吸光值。
【参考值】 实验正常的情况下,阴性对照的平均OD值即ODNC应≤0.3,阳性对照的平均OD值即ODPC应≥0.6。
【检验结果的判定】
1.样品的OD值即ODS;
2.阈值计算:SP值=(ODS-ODNC)/(ODPC-ODNC);
SP值≥0.2,结果判定为阳性;SP值<0.2,结果判定为阴性。
3.本实验结果为阴性时表明猪只抗体水平不足,建议补打相应疫苗。
【试验方法的局限性】
该试验仅作为定性检测猪血清、血浆中猪病毒抗体,根据SP值高低可作抗体水平强、中、弱的粗略评估。
【注意事项】
1.实验操作时需戴手套、穿工作衣,严格健全和执行消毒隔离制度,各种实验废弃物都应按传染物处理。
2.终止液具有腐蚀性,应避免接触皮肤和衣物,如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。
3.酶标板从冷藏环境中取出时应恢复至室温方可开袋,未用完的酶标板需放入有干燥剂的密封袋中保存。
4.浓缩洗涤液在低温时容易结晶,使用时需恢复至室温以溶解。
5.洗涤时各孔均需加满液体,防止孔口有游离酶不能洗净。
6.用于检测的样品应保持新鲜。
7.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。
8.不同批号试剂组分不得混用。
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