细胞复苏：唤醒沉睡的“种子”

一、细胞复苏：唤醒沉睡的“种子"

刚从ATCC获取的冻存细胞就像冬眠的种子，需要温柔唤醒：

快速解冻：37℃水浴中轻轻摇晃，1-2分钟内完成

梯度稀释：用预温培养基按1:5缓慢稀释，避免渗透压冲击

离心去冻存液：1000rpm离心5分钟，去除含DMSO的冻存液

低密度接种：建议初始接种密度为1×10^4 cells/cm²

二、传代操作：把握黄金窗口期

低代次细胞（P3-P8）的传代是保持活性的关键阶段：

时机选择：融合度达80%-90%时传代，避免过度生长

消化控制：0.25%胰酶作用30-60秒，显微镜下观察细胞回缩

终止技巧：用含血清培养基按1:1比例中和胰酶

分盘比例：推荐1:3至1:4分割，保持群体增殖优势

三、活性维持：打造细胞“舒适圈"

这些细节决定细胞的长期表现：

环境稳定：CO2浓度偏差不超过0.5%，温度波动小于0.3℃

营养更新：每48小时更换培养基，陈旧培养基积累代谢废物

冻存策略：P5前建立主细胞库，每代冻存5-10支备用

污染防控：操作前紫外线消毒30分钟，定期检测支原体