以ATCC原代细胞为核心构建体外共培养体系，需围绕细胞特性、培养条件优化及功能协同设计展开，以模拟体内微环境并实现稳定、可重复的实验结果。
1.细胞选择与质量验证
ATCC原代细胞（如人脐静脉内皮细胞HUVEC、肝星状细胞HSC等）需严格遵循其提供的培养指南，包括培养基配方（如EGM-2用于内皮细胞）、血清浓度（通常5%-10%FBS）及细胞传代次数限制（原代细胞通常不超过5代）。使用前需通过形态学观察（如内皮细胞呈“铺路石”样排列）、特异性标记物检测（如CD31免疫荧光染色）及功能验证（如内皮细胞成管实验），确保细胞活性与纯度。
2.共培养模式设计
根据研究目标选择直接接触或间接接触共培养：
直接接触：适用于需细胞间物理信号交互的场景（如肿瘤细胞与成纤维细胞相互作用）。需控制细胞接种比例（如1:1至1:5）及密度（通常1×10⁵cells/cm²），避免竞争性生长抑制。
间接接触：通过Transwell小室或微流控芯片实现可溶性因子（如细胞因子、外泌体）的交换，适用于研究旁分泌效应（如免疫细胞与肿瘤细胞共培养）。需优化孔径大小（0.4μm允许小分子通过，8μm允许细胞迁移）及培养基体积比（上下层1:1至1:2）。
3.培养条件动态调控
共培养体系需模拟体内动态环境：
氧浓度：肿瘤微环境常为低氧（1%-5%），可通过三气培养箱调节；
pH与代谢物：实时监测培养基pH及葡萄糖/乳酸浓度，及时换液（通常每2-3天半量换液）；
机械刺激：对力学敏感细胞（如血管平滑肌细胞），可施加周期性拉伸（如Flexcell系统）以增强功能表达。
4.功能验证与数据分析
通过多维度检测评估共培养效果：
表型分析：流式细胞术检测细胞表面标记物（如PD-L1表达）；
功能检测：ELISA量化细胞因子分泌（如IL-6、TNF-α），Transwell迁移实验评估细胞侵袭能力；
组学分析：单细胞RNA测序揭示细胞间信号通路交互（如Wnt/β-catenin通路激活）。
通过上述策略，可构建高生理相关性的ATCC原代细胞共培养体系，为疾病机制研究及药物筛选提供可靠平台。
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