石斛探针法PCR鉴定试剂盒

本产品仅供科研，不得做其它用途

更多产品详细信息可向客服免费索取订购。

本产品就是根据PCR原理专门开发的试剂盒，它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。

2. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

3. 产品精心优化且特异性高，引物是根据高度保守区设计，不会跟除此之外的其它微生物DNA发生交叉反应。

4. PCR mix中含上样染料，PCR后可以直接上样电泳。

5. 本产品足够50次20μL体系的PCR反应。

6. 本产品只能用于定性实验，不能用于定量。

7. 本产品只能用于科研

石斛探针法PCR鉴定试剂盒样品的制备　

【试剂盒组成】

【储存条件及有效期】避光-20℃以下保存，避免反复冻融，有效期12个月。

【适用仪器】 ABI7500、罗氏 96/480、安捷伦、伯乐、国产博日、宏石等各种荧光定量 PCR 仪。

定义和原理

PCR 探针法试剂盒是基于聚合酶链式反应（PCR）技术，结合探针来检测特定核酸序列的工具包。其原理是在常规 PCR 基础上，加入了一段能与目标核酸序列特异性结合的荧光标记探针。在 PCR 扩增过程中，当探针与目标序列结合后，通过荧光信号的变化来实时监测 PCR 产物的扩增情况。

主要组成成分

引物：是一小段单链 DNA 或 RNA，与目标核酸序列两端互补，引导 DNA 聚合酶进行 DNA 合成，决定了 PCR 扩增的特异性和范围。

探针：带有荧光基团和淬灭基团，在完整状态下，淬灭基团抑制荧光基团的荧光信号。当探针与目标序列结合并被核酸酶切割后，荧光基团和淬灭基团分离，从而产生荧光信号。

DNA 聚合酶：负责在引物的引导下，将脱氧核苷酸（dNTPs）逐个添加到引物的 3' 端，合成新的 DNA 链。

dNTPs：即脱氧核苷三磷酸，包括 dATP、dTTP、dCTP 和 dGTP，是合成 DNA 的原料。

反应缓冲液：为 PCR 反应提供适宜的 pH 值、离子强度等环境条件，保证 DNA 聚合酶的活性和反应的顺利进行。

常见类型

TaqMan 探针法试剂盒：TaqMan 探针是一种寡核苷酸探针，其 5' 端标记荧光报告基团，3' 端标记淬灭基团。在 PCR 扩增过程中，Taq DNA 聚合酶的 5'-3' 外切酶活性会将与目标序列结合的探针切割，使荧光报告基团和淬灭基团分离，荧光信号增强。通过检测荧光信号的强度，可以实时监测 PCR 产物的扩增情况。

分子信标探针法试剂盒：分子信标是一种具有发夹结构的寡核苷酸探针，其两端分别标记荧光报告基团和淬灭基团。在没有目标序列存在时，分子信标呈发夹结构，荧光报告基团和淬灭基团靠近，荧光信号被淬灭。当存在目标序列时，分子信标与目标序列杂交，发夹结构打开，荧光报告基团和淬灭基团分离，产生荧光信号。

优点

高特异性：探针与目标序列的特异性结合，大大提高了检测的准确性，能够有效区分相似的核酸序列。

高灵敏度：可以检测到低拷贝数的目标核酸，适合微量样品的检测。

实时监测：能够实时监测 PCR 扩增过程，准确地测定起始模板的拷贝数。

操作简便：试剂盒提供了预混好的反应体系，减少了操作步骤和误差。

【注意事项】

1.使用本试剂盒的实验室，应严格按照国家有关部分颁布的有关基因扩增检验实验室管理规范进行管理；

2.为避免RNA降解，样本处理过程应在0-4℃条件下操作，且完成实验后立即上机检测；样本处理过程中使用的器具耗材应经过无核酶处理；

3.各区域物品均为专用，不得交叉使用，以免污染；检测结束后，应立即对工作台清洁；

4.吸取反应液时，应尽量避免产生气泡；上 PCR 仪前，应注意检查各反应管是否盖紧，以免液体蒸发造成结果不准确；

5.试剂盒所有试剂在使用前应该在常温下充分融化混匀，并应瞬时离心；

6.试剂盒内所配阴性和阳性对照在第一次使用前应全部转移至标本准备区，并单独存放；

7.为防止荧光干扰，应避免裸手直接接触PCR反应管，并应避免在PCR反应管上进行任何标记；

8.检测过程中使用过的吸头，应直接打到盛有 10%次氯酸的废物缸内，检测结束的PCR 反应管，切忌开盖，并与其他废弃物品一同灭菌后丢弃；工作台及各种实验用品应定期用 10%次氯酸、75%酒精或紫外灯进行消毒；

9.仪器扩增相关参数应按照本说明书相关要求进行设置；不同批号试剂不能混用；并在有效期内使用。

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