pShuttle-CMV-N-Myc（腺病毒质粒）实验操作説明

pShuttle-CMV-N-Myc含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达；在多克隆位点的5'端含有一个可以编码Myc标签的序列，因此可以表达出含有Myc标签的融合蛋白，可以方便地使用抗Myc的抗体来识别目的蛋白，有利于目的蛋白检测和分离纯化。

本质粒为卡那霉素抗性。

重组腺病毒(Recombinant adenoviruses)是一种常见的用于在培养细胞或动物体内表达外源基因的重要工具。重组腺病毒具有感染宿主细胞范围广、感染不依赖细胞分裂、高滴度及目的基因表达水平高等特性。常用的腺病毒载体是人类血清5型腺病毒。改造后的人类血清5型腺病毒，删除了在病毒装配过程中起关键作用的E1基因和非必须的能表达逃避宿主免疫的E3基因，E1和E3基因的删除使得重组腺病毒不能自我复制，同时给外源基因的插入提供了空间，最长可插入7.5kb的外源基因。从而提高了重组腺病毒的的安全性和可操作性。再利用携带E1基因的AD-293、293A、HEK293等细胞作为包装细胞就可以完成重组腺病毒的包装。

pShuttle系列的穿梭质粒携带外源目的基因，经过Pme I线性化，随后与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1(8106)共转染到大肠杆菌BJ5183中，或者转染到已经已经预转染了pAdEasy-1质粒的BJ5183菌株(8107)中同源重组。BJ5183菌株表达recET基因，具有很高的基因同源重组(homologous recombination)活性，使带有目的基因的穿梭质粒与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1通过末端反向重复序列同源重组，实现外源基因与腺病毒基因组的整合。将重组的携带外源基因的腺病毒质粒用Pac I线性化后转染到AD-293、293A、HEK293等重组腺病毒包装细胞中进行包装。从而制备获得高滴度、自我复制缺陷并且带有目的基因的重组腺病毒。

目的基因引入时不能含有Pme I及Pac I这两个酶切位点，如果含有该两个酶切位点的目的基因，需要对该位点进行突变方可进行基因操作。

pShuttle-CMV-N-Myc质粒的主要信息如下：

pShuttle-CMV-N-Myc质粒的图谱如下：

pShuttle-CMV-N-Myc的多克隆位点的的详细图谱见说明书

pShuttle-CMV-N-Myc中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pShuttle-CMV-N-Myc)包括：

pShuttle-CMV-N-Myc中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pShuttle-CMV-N-Myc)包括：

pShuttle-CMV-N-Myc质粒中推荐使用的测序引物序列如下：

forward primer (888-907): 5´GGTCTATATAAGCAGAGCTG3´

Reverse primer (1048-1070): 5´GTGGTATGGCTGATTATGATCAG3´

pShuttle-CMV-N-Myc的全序列信息:pShuttle-CMV-N-Myc.txt。

-20℃保存。

本质粒未经书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。